實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為重要的研究載體，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量直接關(guān)乎實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，目前使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，大鼠和小鼠占有非常高的比重，需要靈敏、快速、特異性高、性價(jià)比高的檢測(cè)方案，來(lái)實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原微生物的檢測(cè)和篩查。

2023年7月開(kāi)始實(shí)施的國(guó)標(biāo)GB14922—2022《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物、寄生蟲(chóng)學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》文件中對(duì)SPF大鼠小鼠需要排除的病毒、病原菌的項(xiàng)目做了明確要求。GB14922—2022指出，按 GB/T 14926（所有部分）和GB/T 18448（所有部分）的規(guī)定對(duì)項(xiàng)目的所有指標(biāo)要求逐項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè)。GB/T 14926 是推薦性國(guó)標(biāo)，主要是涉及病毒、病原菌的檢測(cè)方法，包括培養(yǎng)法和血清學(xué)檢測(cè)如酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)、免疫酶實(shí)驗(yàn)、血凝試驗(yàn)等。GB/T 18448也是推薦性國(guó)標(biāo)，主要是涉及寄生蟲(chóng)的檢測(cè)方法，如鏡檢等。這些檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)大多是20年前的標(biāo)準(zhǔn)，近幾年新興起的核酸PCR檢測(cè)方法則靈敏度更高、特異性更強(qiáng)、檢測(cè)更高效。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原微生物檢測(cè)近期已發(fā)布的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)（CALAS）在2017年發(fā)布了二十多個(gè)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，例如：

T/CALAS 49—2017 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 仙臺(tái)病毒PCR檢測(cè)方法》，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了仙臺(tái)病毒普通 RT-PCR 和實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR 檢測(cè)方法，適用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物懷疑本病發(fā)生，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境和動(dòng)物源性生物制品中仙臺(tái)病毒的檢測(cè)。

T/CALAS 50—2017《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 呼腸孤病毒III型PCR檢測(cè)方法》，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了呼腸孤病毒III型普通 RT-PCR 和實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR 檢測(cè)方法。標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物懷疑本病發(fā)生，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境和動(dòng)物源性生物制品中呼腸孤病毒III型核酸檢測(cè)。

2025 年 7 月中國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)（CVMA ）發(fā)布和實(shí)施了三項(xiàng)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)：

T/CVMA 272—2025 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 鞭毛蟲(chóng)PCR檢測(cè)方法》，文件描述了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物鞭毛蟲(chóng)的PCR檢測(cè)方法，適用于實(shí)驗(yàn)小鼠、大鼠的鞭毛蟲(chóng)定性檢測(cè)。

T/CVMA 273—2025 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 蟯蟲(chóng)PCR檢測(cè)方法》，文件描述了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物蟯蟲(chóng)的PCR檢測(cè)方法，適用于實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠的蟯蟲(chóng)定性檢測(cè)。

T/CVMA 274—2025 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 鼠棒狀桿菌熒光PCR檢測(cè)方法》，文件規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物鼠棒狀桿菌的熒光PCR檢測(cè)方法，適用于實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠的鼠棒狀桿菌定性檢測(cè)。

以上這些團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)中，都將核酸分子檢測(cè)手段如普通PCR和熒光定量PCR作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的病原微生物的檢測(cè)方法，說(shuō)明核酸分子PCR檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原微生物檢測(cè)的有效手段。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原微生物qPCR的檢測(cè)方法

核酸分子PCR檢測(cè)提升了檢測(cè)效率和靈敏度，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原微生物檢測(cè)的有效手段，開(kāi)發(fā)了多款檢測(cè)試劑盒。翼和生物結(jié)合市場(chǎng)需求，采用多重?zé)晒舛?/span>qPCR檢測(cè)方案，設(shè)計(jì)特異性的病原體檢測(cè)引物，開(kāi)發(fā)了多款針對(duì)SPF大鼠小鼠的病毒和病原菌檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)的病原項(xiàng)目符合國(guó)標(biāo)GB14922—2022《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物、寄生蟲(chóng)學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》中的病毒和細(xì)菌、真菌的檢測(cè)項(xiàng)目要求。

首先針對(duì)特定核酸區(qū)段，設(shè)計(jì)特異性的病原體檢測(cè)引物，確保每一款試劑盒都能精準(zhǔn)識(shí)別目標(biāo)病原體，有效避免非特異性擴(kuò)增帶來(lái)的假陽(yáng)性。qPCR檢測(cè)試劑盒內(nèi)包含陽(yáng)性對(duì)照，可通過(guò)觀察陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增曲線，判斷qPCR過(guò)程是否正常。同時(shí)核酸提取過(guò)程中引入外源核酸基因組（內(nèi)參），參與提取過(guò)程，提取好的樣本核酸在熒光定量qPCR檢測(cè)過(guò)程中通過(guò)CY5通道進(jìn)行外源基因組（內(nèi)參）的檢測(cè)，可有效質(zhì)控核酸提取過(guò)程，避免因核酸提取失敗導(dǎo)致的假陰性。

翼和生物SPF大鼠小鼠多重?zé)晒?/span>qPCR檢測(cè)試劑盒的優(yōu)勢(shì)除了熒光定量qPCR試劑盒固有的高效、快捷、靈敏度高等優(yōu)勢(shì)外，而且所有試劑盒的PCR循環(huán)程序通用，無(wú)需區(qū)分病毒和病原菌。多種樣本類型提取核酸時(shí)只有前處理裂解過(guò)程略有差異，其他提取操作步驟一致，方便批量處理。